非洲豬瘟檢測儀配套試劑-一款檢測準確的非洲豬瘟試劑盒#2022已更新主要用于疑似病毒等病原感染抗凝血、血淸、拭子、組織、飼料及環(huán)境中的病毒DNA的提取,純化的核酸可適用于各種常規操作及PCR試驗。
核酸DNA提取試劑盒(柱膜法)使用說(shuō)明書(shū)
【產(chǎn)品名稱(chēng)】
通用名稱(chēng):病毒DNA提取試劑盒
英文名稱(chēng):Extraction Kit for Virus DNA
【預期用途】
本試劑盒主要用于疑似病毒等病原感染抗凝血、血淸、拭子、組織、飼料及環(huán)境中的病毒DNA的提取,純化的核酸可適用于各種常規操作及PCR試驗。
【試劑盒組分】
I、試劑盒組成及貯藏條件
名稱(chēng) | 20 T | 50 T |
1、吸附柱 | 20個(gè) | 50個(gè) |
2、收集管 | 20個(gè) | 50個(gè) |
3、裂解液 | 5 mL | 11 mL |
4、洗液I | 13 mL | 32 mL |
5,洗液II | 13 mL | 32 mL |
6.洗脫液 | 1.2 mL | 3 mL |
2、 保存條件及有效期:室溫下保存,有效期12個(gè)月.
3、 需自備材料:無(wú)水乙醇、1.5 mL無(wú)菌離心管、1.5 mL無(wú)菌離心管(長(cháng)臂型)、生理鹽水、研缽、無(wú)菌
1mL, 2OOuL、10uL槍頭、記號筆等。
【操作步驟】
一、樣品制備
1、 血液樣品:抗凝血樣品置離心管中,8000轉/分鐘離心2分鐘,取上層血漿;非抗凝血樣品置離心 管中,待凝固后,8000轉/分鐘離心2分鐘,取上層血清,置于滅菌離心管中,編號待檢。
2、 組織樣品:采集脾臟、肝臟、淋巴結、扁桃體等病變組織樣品0.1g.組織勻漿器或研缽中充分勻漿或研磨,加入1 mL生理鹽水混勻,8000轉/分鐘離心2分鐘,取上清于滅菌離心骨中,編號待檢。
3、 口腔液:進(jìn)食前用拭子/口腔液采集袋或自制棉線(xiàn)綁紗布團吸引動(dòng)物咀嚼,收集口腔液大于 500uL, 8000轉/分鐘離心2分鐘,取上清于滅菌離心管中,編號待檢。
4、 飼料:取適量研磨后的飼料(約0.2g),放入含1 mL生理鹽水或PBS(PH為7.4)緩沖液的2 mL EP 管屮,振蕩混勻,8000轉/分鐘離心2分鐘,取上清于滅菌離心管中,編號待檢.
5、 灰塵:用無(wú)菌棉簽蘸取適量環(huán)境表面上的灰塵,放入含1 mL生理鹽水或PBS(PH為7.4)緩沖液的2 mL EP管中,振蕩混勻,8000轉/分鐘離心2分鐘,取上清于滅菌離心管中,編號待檢。
二、DNA的提取
1、取裂解液200uL加入無(wú)核酸酶1.5 mL離心曾屮,分別加入血漿/血清/組織液等樣品液200uL. 震蕩混勻10秒或顛倒混勻10次,室溫放置5分鐘(如果室內溫度較低時(shí).需放置25C水浴溫育),再加入200uL無(wú)水乙醇,顛倒混勻10秒;若樣品渾濁則先12000轉/分鐘離心1分鐘處理,取上清液,以避免堵塞柱子;
2、 將液體轉入套有收集管的吸附柱中, 12000rpm離心1分鐘:
3、 棄收集管液體,向吸附柱中加600uL洗液I , 12000 rpm離心1分鐘;
4、 棄收集管液體,向吸附柱中加600uL洗液II, 12000 rpm離心I分鐘;
5、 棄收集管液體,12000 rpm離心2分鐘,以去除殘留洗液;
6、將吸附柱轉入新的無(wú)核酸酸1.5mLEP管(長(cháng)臂型)中,向柱中央滴加50 uL洗脫液,靜置1分鐘, 12000 rpm離心1分鐘,EP管中液體即為病毒DNA。
【注意事項】
1、 實(shí)驗前諾仔細閱讀本試劑盒說(shuō)明書(shū),嚴格按照操作步驟執行.在操作過(guò)程中對時(shí)間、試劑體積等 粘確控制可以獲得好的結果。
2, 樣本應新鮮采集使用,或低溫運輸儲存;
3, 樣本具有潛在感染風(fēng)險,核酸的提取應在核酸提取實(shí)驗室的生物安全柜中進(jìn)行。
4、 核酸提取冇關(guān)耗材確保高溫滅菌,提取后核酸盡快進(jìn)入下一步試驗或冷凍保存待用。
5, 試劑使用前應混合均勻,試劑具有一定腐蝕性,使用時(shí)請戴手套、口罩做好防護。
6. 低溫下裂解液出現結晶數屬正?,F象,可在60°C水浴加熱助溶后使用。
7、 實(shí)驗產(chǎn)生的廢棄物應及時(shí)收集,遠離PCR實(shí)驗室進(jìn)行無(wú)害化處理。
僅供獸醫診斷使用
非洲豬瘟病毒熒光PCR核酸檢測試劑盒說(shuō)明書(shū)
【獸藥名稱(chēng)】
通用名稱(chēng):非洲豬瘟病毒熒光PCR核酸檢測試劑盒
漢語(yǔ)拼音:Feizliouzhuwen Bingdu Yingguang PCR Hesuan Jianceshijihe
英文名稱(chēng):African swine Fever Virus (ASFV) PCR Nucleic Acid Diagnostic Kit
商品名稱(chēng):無(wú)
【主要成分與含量】試劑盒中含有如下組分:
試劑盒組分 | 含量 |
陽(yáng)性對照 | 250μL/管×1管
|
陰性對照 | 250μL/管×1管
|
PCR反應液 | 850μL/管×1管
|
萌混合液 | 150μL/管×1管
|
說(shuō)明書(shū) | 1份/盒 |
【作用與用途】 本試劑盒可用于血液、脾臟、肝臟、淋巴結、 樣品中非洲豬瘟病毒核酸的檢測。 扁桃體、腎臟、肌肉、環(huán)境樣品等 |
【用法與判定】
1 用法
1.1待檢樣品釆集、保存及運輸
1.1.1樣品釆集
(1) 活豬樣品 無(wú)菌采集抗凝血或血清5mL
(2) 病死豬剖檢樣品或屠宰場(chǎng)剖檢樣品 無(wú)菌采集死豬的牌、肺、腎、扁桃體、淋巴結、肌肉等組織樣品。2?8°C低溫運至實(shí)驗室用于檢測。
(3) 病豬污染的周邊環(huán)境 采集與病豬相關(guān)場(chǎng)所的糞便、飼料、污水樣品。2?8°C低溫運至實(shí)驗室用于檢測。
1.1.2樣品保存 采集的樣品在2?8°C保存應不超過(guò)24小時(shí),-70°C條件下保存,避免反復凍 融。
1.1.3樣品運輸泡沫箱加冰袋后密封進(jìn)行運輸。包裝和運輸應符合農業(yè)農村部《高致病性動(dòng) 物病原微生物菌(毒)種或者樣品運輸包裝規范》和交通運輸部門(mén)關(guān)于危險品運輸管理的有關(guān)規定。
1.2樣品處理
1.2.1血液樣品處理 抗凝血樣品置于離心管中,8000 r/min離心2分鐘取上層血漿,編號待 檢。非抗凝血樣品置于離心管中,待凝固后,8000 r/min離心2分鐘取200μL上層血清,編號待檢。
1.2.2組織樣品處理取適量脾臟、肝臟、淋巴結、扁桃體、肌肉等組織,置于研磨器或研磨管中研磨,再加適量生理鹽水混勻,制成約10%的組織勻漿,8000 r/min離心2分鐘,取200μL上 清于RNase/DNase-free無(wú)菌離心管中,編號備用。
1.2.3環(huán)境樣品處理
1.2.3.1糞便、飼料樣品處理方法取適量的糞便、飼料放入盛有PBS緩沖液的研磨管中研磨混勻,制成約10%的勻漿液.8000 r/min離心2分鐘,取200μL上清于RNase/DNase-free無(wú)菌離心 管中,編號備用。
1.2.3.2污水樣品處理方法 直接取200μL污水進(jìn)行核酸提取。
1.3病毒核酸的提取用磁珠法或柱式法進(jìn)行DNA核酸提取。
1.4熒光PCR反應:
1.4.1從試劑盒中取出熒光PCR反應液、酶混合液,室溫融化后,2000 r/min離心5秒。設被 檢樣品、陽(yáng)性對照和陰性對照總和為n,則反應體系配制如下:
試劑 體系
PCR 反應液 17× (n+1) μL
酶混合液 3× (n+1) μL
1.4.2在新的RNase/DNase-fire 1.5 ml離心管中加入上述試劑,充分混勻后瞬時(shí)離心。按照20μL/ 管分裝量將試劑分裝至熒光PCR反應管。
1.4.3在上述制備好的熒光PCR反應管中分別加入陰性對照、陽(yáng)性對照各5μL、處理好的待測核酸各5μL,終體積25μL/管,蓋好熒光PCR反應管蓋,混勻后瞬時(shí)離心,轉移到熒光PCR儀器 上。
144將PCR反應管放置在熒光PCR儀樣品槽中,在熒光PCR儀上運行以下程序:
步驟 | 條件 | 循環(huán)數 | ||
50, 1 | ||||
預變性 | ℃3分鐘 | 95 ℃: 8 秒 55 ℃: 8 秒
| PCR擴増 | 40 |
熒光通道選擇FAM,在PCR擴增階段每個(gè)循環(huán)的55℃時(shí)采集熒光信號。設置擴增體系為25μL, 同時(shí)要選擇passive reference和quencher為none的模式。(注:若熒光PCR儀(如AB17500)按說(shuō)明 書(shū)中的反應程序設置后因持溫時(shí)間短無(wú)法運行,可將預擴增和PCR擴增條件變更為95C: 5秒 55°C: 30 秒)
2結果判定
2.1試驗有效性判定
陽(yáng)性對照有典型擴增曲線(xiàn)且Ct值≤30.且陰性對照無(wú)Cl值或無(wú)擴增曲線(xiàn),線(xiàn)形為直線(xiàn)或輕微斜線(xiàn),無(wú)指數增長(cháng)期。則判試驗結果有效。否則,此次試驗視為無(wú)效。
2.2樣品判定
2.2.1陽(yáng)性:樣本檢測結果Ct值≤35且有明顯指數增長(cháng)期,判定檢出非洲豬瘟病毒核酸。
2.2.2可疑:樣本檢測結果Ct值在35?38范圍內。此時(shí)應對樣本進(jìn)行重復檢測,如果重復實(shí)驗 結果Ct值仍在35?38范圍內,有明顯指數增長(cháng)期.則判定為陽(yáng)性,否則為陰性。
2.2.3陰性:樣本檢測結果Ct值>38或無(wú)Ct值,判定未檢出非洲豬瘟病毒核酸。
【注意事項】(1)實(shí)驗前請仔細閱讀本試劑盒說(shuō)明書(shū),嚴格按照操作步驟執行,在操作過(guò) 程中對時(shí)間、試劑體積等精確控制可以獲得好的結果。
(2) 實(shí)驗室應嚴格按照有關(guān)規定分區管理,依照配液區-模板提取區-擴增區-分析區順序 進(jìn)行基因檢測。各區間人員、器材、試劑及空氣流向應有嚴格要求。
(3) 核酸提取有關(guān)耗村確保潔凈、無(wú)DNase/RNase,提取過(guò)程盡量低溫、快速,完成后進(jìn)入 下一步實(shí)驗或凍保。
(4) 對于頂部采光儀器要帶新的一次性PE手套對熒光PCR管封蓋,對于底部采光儀
器要避免徒手或使用過(guò)的手套接觸熒光PCR管底,檢測過(guò)程中使用不帶熒光物質(zhì)一次性乳膠手套。
(5) 凍存試劑使用前應于室溫下融化,瞬時(shí)離心使液體沉于管底。避免反復凍融, 以免影響試劑性能。
(6) 樣品、陽(yáng)性對照等在使用后及時(shí)封蓋,.避免組分間及氣溶膠等的污染造成假陽(yáng)性。
(7) 擴增產(chǎn)物禁止開(kāi)蓋,實(shí)驗產(chǎn)生的廢棄物應及時(shí)收集,遠離PCR實(shí)驗室進(jìn)行無(wú)害化處理。
【規格】50頭份/盒
【貯藏與有效期】試劑盒置-20°C以下避光保存,有效期12個(gè)月。
【批準文號】獸藥生字163668871
【生產(chǎn)企業(yè)】鄭州中道生物技術(shù)有限公司
僅供獸醫診斷使用
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